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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人子宮成纖維細胞

英文名稱：Human Uterine Fibroblast Cells

組織來源：子宮組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人子宮成纖維分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持，這些結構受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的子宮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。子宮成纖維細胞的主要特征：①是子宮的重要細胞組成，在體外易于培養(yǎng)；②在子宮損傷后能修復和重塑子宮；③在子宮炎癥時能有效控制炎癥擴散。

公司實驗室分離的人子宮成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人子宮成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

小鼠型纖溶酶原激活物受體   英文名稱：   urokinase-plasmingen activator receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   uPA-R

小鼠超敏感度促甲狀腺素   英文名稱：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   U.TSH

線粒體解偶聯(lián)蛋白2   英文名稱：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   規(guī)格：      英文縮寫：   UCP2

小鼠血管細胞粘附分子-1   英文名稱：   vascuiar endothelial cells adhesion molecule 1   規(guī)格：      英文縮寫：   VCAM-1

小鼠絨毛膜β(β-CG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human brain g peptide (BGP/Gehrelin) ELISA Kit 人腦腸肽(BGP/Gehrelin)試劑盒

Humanvionectin,VELISAKit 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigImmunoglobulinA,IgA試劑盒豚鼠免疫球蛋白A(IgA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量試劑盒20次

Mousecardioophln1,CT-1ELISAKit小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD200重組人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

粒細胞集落刺激因子(GCSF)重組蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

PSMA3重組人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

CPB2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

NP Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

粒細胞集落刺激因子(GCSF)重組蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 3, Granulocyte (GCSF)

CPB2 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase B2 / CPB2 蛋白

CD200重組人 CD200 / OX-2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

NP Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP)

PSMA3重組人 PSMA3 / Proteasome 20S alpha 3 蛋白 Protein

人子宮成纖維細胞大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶4(NOX4)試劑盒 ，英文名： NOX4 ELISA Kit

Mouse thrombopoietin (TPO) ELISA Kit 小鼠血小板生成素(TPO)試劑盒

RatcoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 大鼠Ⅹ(FⅩ)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGM1(Humanai-gangliosideaibody)ELISAKit人抗抗體

細胞二脂酰甘油(DAG)含量酶連續(xù)循環(huán)反應比色法定量試劑盒20次

RatSubstanceP,SPELISAKit大鼠P物質(zhì)(SP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用