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細(xì)胞簡介：

兔胰腺星狀分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA，而不再表達(dá)Desmin，說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰腺星狀采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3-5代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

鴨病毒性腸病毒試劑盒   鴨病毒性腸病毒試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   鴨病毒性腸病毒試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鴨病毒性腸病毒試劑盒、鴨病毒性腸病毒eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

鴨白介素6試劑盒   鴨白介素6試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   鴨白介素6試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鴨白介素6試劑盒鴨白介素6試劑盒、鴨白介素6eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

鴨白介素4試劑盒   鴨白介素4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   鴨白介素4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鴨白介素4試劑盒、鴨白介素4eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人晶體蛋白β試劑盒   人晶體蛋白β試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人晶體蛋白β試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人晶體蛋白β試劑盒、人晶體蛋白βeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠總(TC)試劑盒 96T/48T

Human natural deoxyribonucleic acid aibody (n-DNA-Ab) ELISA Kit 人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)試劑盒

HumanPyridinoline,PYDELISAKit 人酚(PYD)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACAST-DIV(HumanaoaibodiesagainsttheC-terminaldomainIV)ELISAKit人抗鈣蛋白酶抑素抗體

藥品糖精(saccharin)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Mousep53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit小鼠p53(p53)試劑盒規(guī)格：96T/48T

REG3A重組大鼠 REG3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8 0.5mgFGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纖維細(xì)胞生長因子-8/纖維母細(xì)胞生長因子-8 (抗原)

PDE2A重組人 PDE2A / CGS-PDE 蛋白 (aa 215-900, His 標(biāo)簽) Protein

CASP7 Protein Human 重組人 CASP7 / caspase 7 / MCH3 蛋白

EPCAM Protein Mouse 重組小鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8 0.5mgFGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纖維細(xì)胞生長因子-8/纖維母細(xì)胞生長因子-8 (抗原)

CASP7 Protein Human 重組人 CASP7 / caspase 7 / MCH3 蛋白

REG3A重組大鼠 REG3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

EPCAM Protein Mouse 重組小鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

PDE2A重組人 PDE2A / CGS-PDE 蛋白 (aa 215-900, His 標(biāo)簽) Protein

兔胰腺星狀細(xì)胞大鼠肌酐(Cr)試劑盒 ，英文名： Cr ELISA Kit

Rabbit 8- isoprostane (8-epi-PGF2 a) ELISA Kit 兔8-異構(gòu)前列腺素(8-epi-PGF2α)試劑盒

對蝦皮下和造血器官壞死病毒(HHNV)核酸試劑盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMousesmallnuclearribonucleoprotein,sNP/SmELISAKit小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體

體液鈣離子濃度比色法定量試劑盒20次

ELISAKit6-keto-PGF1a人6同前列腺素F1a

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。